该人胰腺癌细胞PANC-1来源于一名56岁白人男性。1 U/ml 左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生长。此细胞可以在琼脂糖上生长。

细胞诱导构建实验步骤

1. MTT法检测PANC-1对吉西他滨的IC50

将处于对数生长期的PANC-1细胞传代后，以6000/孔的密度接种在96孔板里，待细胞生长稳定后，将培养基更换为含不同浓度吉西他滨的完全培养基，浓度依次为0.03μg/mL、0.3μg/mL、1.5μg/mL、3μg/mL、6μg/mL、12μg/mL、18μg/mL。置于含5%CO2、饱和湿度的37℃恒温细胞培养箱中培养72h。取出96孔板，每孔加入20ul MTT（5 mg/mL）溶液加入到每个培养孔中，继续培养4 h。4 h后，取出96孔板，吸除培养基，排枪每孔加入150 µL Formazan溶液，置摇床上低速振荡10-30min，使结晶物充分溶解。使用酶标仪在OD 570nm处测量各孔的吸光值，分析实验结果，得出IC50为0.9μg/mL，则选择此浓度作为PANC-1耐药株诱导的起始浓度。

2  PANC-1细胞耐药分步诱导

取处于对数生长期的PANC-1细胞，加入含0.9μg/mL吉西他滨的完全培养基，置于含5%CO2、饱和湿度的37℃恒温细胞培养箱中培养。隔日换液（同浓度含药培养基），待细胞可以稳定生长后加大药物浓度，每次增加2倍，直至10个月后，细胞可以在含18μg/mL吉西他滨的完全培养基保持稳定生长4day，视为细胞耐药成功，并命名为PANC-1/GEM。

 1）准备DMEM （含NaHCO3 1.5g/L或者GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)培养基，优质胎牛血清15%，GlutaMAX-1谷氨酰胺1%，P/S 1%（可在完全培养基中加入最大耐药浓度18ug/ml的GEM)

该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。

2）细胞在传代和刚复苏时较为脆弱，中止液须为不含GEM的完全培养基，且在细胞未贴壁期间和贴壁前期需用不含GEM的完全培养基，待细胞生长状态稳定时再根据需要浓度添加 GEM。

3）若细胞生长状态较为缓慢时，可适当降低GEM的浓度，或使用不含GEM的完全培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的GEM浓度。

4）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

5）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。