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【M-C1366】NCI-N87+luc 人胃癌细胞荧光素酶标记(STR(NCI-N87鉴定)

1) 来源:胃癌,肝转移
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x106  细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)  用途:仅供科研使用。

特征特性

NCI-N87细胞表达表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72, 并且没有左旋多巴胺脱羧酶(DDC)活性。它们的血管活性的肠肽(VIP)受体活性极低并缺乏胃泌激素受体。 它们表达蕈毒碱胆碱受体。没有证据表明存在N-myc, L-myc, myb和EGF受体基因的重组。这个细胞株表达的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平与其它细胞株相当。以下基因不表达: N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2, 或胃泌激素释放肽。据报道NCI-N87 细胞的植板率为4.3%。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

细胞筛选

该细胞为稳定转染Luc的细胞,随细胞传代次数的增加,其Luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。        

建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。

初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。


培养条件

RPMI-1640 +10%FBS+GlutaMAX-1  1%+Sodium Pyruvate丙酮酸钠 +1%+1%P/S

培养环境:空气,95%; =氧化碳, 5%

温度: 37°C,培养箱湿度70%-80%

冻存条件:90%FBS,10%DMSO现配

注意事项:该细胞贴壁较慢,且生长缓慢,建议复苏、传代后让细胞贴壁48h后再进行后续实验操作。细胞最初将附着形成小岛状,然后在这些密集的斑块中增殖,因此很难正确估计汇合度。避免细胞过密生长,及时更换新鲜培养基,以免培养基的pH受到不利影响。该细胞培养时,在培养基中会有一些漂浮细胞和碎片,并且在该细胞中可能会观察到较大的“囊泡”和颗粒状外观,是正常现象。

订购详情

发货形式 规格 数量 价格 货期
冻存管/T25 >1x10^6/1ml X1/T25 询价 现货

操作手册

T25培养瓶
收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好,如有破损漏液等问题,请即时联系。正常请进行以下操作:
1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。
2. 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理,以稳定细胞状态。
3. 显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(40×,100×,200×各一张)
前三天照片为重要售后依据,不提供或未拍照默认收到状态良好。
4. 贴壁细胞:若细胞密度低于80%,无菌操作去掉培养基。加入准备的5-6ml培养基放37度培养箱培养,待细胞密度达到80%以上进行传代。密度80%以上,可以将细胞传代处理。
悬浮细胞:将瓶内所有培养基离心收集,重悬计数根据密度进行分瓶,密度在3-5x10^5/ml为宜。

2ml冻存管
收到细胞后,检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题,请即时联系。正常请进行以下操作:将细胞取出转移至液氮保存或-80度冰箱(不超过一周),建议尽早复苏。复苏第一管后有活性状态问题及时与我们联系,会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。特别说明:两管一次性复苏出现问题不做售后。

15ml离心管
75%酒精棉球擦拭15ml离心管外部去封口膜,将15ml细胞悬液均匀接种到2个T25规格培养瓶,第二天观察细胞状态,根据密度进行换液或分瓶。