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【M-C1218】NK-92MI; NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-hIL2

Organism: /human

Morphology: 淋巴母细胞样/lymphoblast

Culture Properties: 悬浮/suspension


特征特性

NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中,转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性;铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征:CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性;CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高,而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体,其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体。处理后6周,用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测,结果都呈阴性。

培养条件

培养条件:MEMα+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+12.5% HS+12.5% FBS+1% P/S

培养环境:空气,95%;二氧化碳,5%

温度:37℃,培养箱湿度70%-80%

冻存条件:90%FBS,10%DMSO现配


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 冻存管

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操作手册

T25培养

收到细胞后检查外包装及细胞培养瓶是否完好,如有破损漏液等问题,请即时联系。正常请进行以下操作:

1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2. 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理,以稳定细胞状态。

3. 显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(40×,100×,200×各一张)

前三天照片为重要售后依据,不提供或未拍照默认收到状态良好。

4. 贴壁细胞:若细胞密度低于80%,无菌操作去掉培养基。加入准备的5-6ml培养基放37度培养箱培养,待细胞密度达到80%以上进行传代。密度80%以上,可以将细胞传代处理。

悬浮细胞:将瓶内所有培养基离心收集,重悬计数根据密度进行分瓶,密度在3-5x10^5/ml为宜。

2ml冻存管

收到细胞后,检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题,请即时联系。正常请进行以下操作:将细胞取出转移至液氮保存或-80度冰箱(不超过一周),建议尽早复苏。复苏第一管后有活性状态问题及时与我们联系,会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。特别说明:两管一次性复苏出现问题不做售后。

15ml离心管

75%酒精棉球擦拭15ml离心管外部去封口膜,将15ml细胞悬液均匀接种到2T25规格培养瓶,第二天观察细胞状态,根据密度进行换液或分瓶