使用非接触的免疫磁珠标记单个核细胞，从中分离获得CD8+ T细胞。

完全培养基：IMDM/DMEM/RPMI-1640+10%灭活的FBS

产品复苏

1. 开启水浴锅至37C，提前预热完全培养基。

2. 从液氮中取出细胞，用 70%酒精棉球擦拭冻存管表面，随后在生物安全柜中适度拧松管盖，平衡 气压后，再拧紧。

3. 在37C水浴锅中快速解冻细胞，不停晃动并查看，当冻存管中只剩少量冰晶时即可停止。

a）尽可能避免水没过冻存管帽，建议用镊子夹住冻存管连续晃动，以降低污染的风险。

b） 2min 内务必完成细胞复苏过程，时间过久会导致复苏细胞活率较差。

4. 待细胞冻存液完全解冻，用 70%酒精棉擦拭冻存管的外壁后拿入生物安全柜，开盖后吹匀细胞悬 液，取10pL用于细胞计数。计数方法：按照1:1与台盼蓝混合后使用血球计数板计数，或按照 计数仪使用说明进行计数，记录细胞活力和细胞密度。

5. 将剩余细胞悬液转移至50mL离心管中，并用1mL完全培养基润洗冻存管，收集残留的细胞。

6. 缓慢滴加15-20mL完全培养基至高浓度细胞悬液中（约1mL/秒），同时晃动离心管，完全混匀 后在室温下离心 300g、15min。

7. 离心后转移上清到新的离心管中，暂时不要丢弃，以免细胞未完全收集而造成较大损失。

8. 按需加入新鲜的完全培养基重悬细胞，并再次计数，用于后续实验。

注意：

・ 若需再次洗涤细胞，则重复步骤6-8,每次洗涤会造成10-15%的细胞损失。

区 若离心后细胞数量低于预期，请将步骤7的上清液离心500g、15min,再次收集。