产品复苏 ● 开启水浴锅预热至37℃,干细胞专用培养基提前预热至25℃左右; ● 无菌条件下,吸取10ml专用培养基加入到15ml离心管中备用; ● 从低温容器中取出冻存管,立即置于水浴中来回迅速摇晃,直至冻存液完全解冻,此过程控制在2min以内; 注意: 1 尽可能避免水没过冻存管帽,建议用镊子夹住冻存管连续晃动,以降低污染的风险 2 2min内务必完成细胞复苏过程,时间过久会导致复苏细胞活率较差,无法贴壁 ● 待细胞冻存液完全解冻,用75%酒精擦拭冻存管的外壁后拿入超净台内; 无菌条件下,迅速将细胞悬液转移至含有10ml专用培养基的离心管中,用移液管轻柔吹打混匀细胞后进行接种,按照(1-1.5)Ⅹ104cell/cm2的密度进行接种(例如:100万/管细胞可接种至3个T-25培养瓶中或1个T-75培养瓶中)。 注意: 1 由于刚复苏的细胞比较脆弱,请勿离心处理,整个操作过程保持轻柔 2 为了保证复苏培养效果,推荐使用Corning等国际一线品牌的培养瓶/皿 ● 将培养瓶/皿置于平面上,轻柔上下左右十字摇晃5次,使细胞悬液均匀分布于培养瓶/皿中; ● 在培养瓶/皿上方标识好细胞信息,转移至5%CO2、37℃、湿度为95%的二氧化碳培养箱中培养; 注意:为了保证贴壁效果,2h请勿移动培养瓶/皿 ● 24h后进行全量换液处理,之后每隔2天换液一次;当细胞汇合度达到80-90%时,进行传代处理。