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【M-CDRY0100-5001】iPS细胞消化液 ...
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操作说明
1. 将iPS完全培养基取出并平衡至室温,取出包被过Matrix的培养皿/瓶,吸去包被液并加入适量完全培养基,置于5% CO2的37℃恒温细胞培养箱中。
2. 吸走待传代细胞培养皿/瓶中的iPS完全培养基,并且加入无钙镁的PBS溶液洗一次。
3. 加入0.5mM EDTA传代工作液使之完全覆盖皿/瓶底。
4. 室温放置5 ~ 8 min或37℃恒温细胞培养箱中孵育3 ~ 5 min,显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离皿/瓶底,克隆内部大部分细胞间出现间隙但尚未相互分离,肉眼观察到细胞集落变得不透明且发白,表明细胞消化时间理想。
5. 吸去传代工作液,即刻加入新鲜的iPS完全培养基,用移液器扇形吹打培养皿/瓶底,使皿/瓶底贴附的干细胞集落脱落,轻柔缓慢吹吸混匀。
注:吹吸的力度要轻柔,吹打脱落和吹吸混匀的次数总共不超过10次为宜。吹打过度导致大量单细胞出现是造成细胞分化或死亡的重要原因。
注:如有少量细胞无法从皿底脱落,属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落,需延长消化时间。
6. 显微镜下观察细胞呈4 ~ 20个细胞大小的团块,水平十字摇匀。
7. 将细胞置于5% CO2的37℃恒温培养箱培养。
8. 每天换液直至达到可以传代的标准。
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【M-CDRY0100-100】IPS细胞铺底工作液...
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